食品中防腐劑和甜味劑的高效液相色譜儀（HPLC）檢測方案

食品中防腐劑和甜味劑的高效液相色譜儀(HPLC)檢測方案

食品加工工藝和防腐的需要，以及為了改善食品品質(zhì)和色、味、香，在食品生產(chǎn)加工過(guò)程中，食品中 通常會(huì )加入少量的天然或者化學(xué)合成的物質(zhì)。近幾年，由于食品安全問(wèn)題層出不窮，人們越來(lái)越重視食 品添加劑所帶來(lái)的安全隱患。

以下是苯甲酸、山梨酸和安賽蜜、糖精鈉的詳細檢測方法。

1、儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀

Vertex 色譜柱 250mm×4.6mm×5μm； 超聲波水浴振蕩器；

食品粉碎機；

pH 計；

天平：分度值為 0.001 mg。

1.2 試劑

甲醇：色譜純

乙酸銨溶液：稱(chēng)取 1.54 g 乙酸銨，加水溶解并稀釋至 1000 mL，經(jīng) 0.45μm 微孔濾膜過(guò)濾。 亞鐵氰話(huà)鉀溶液：稱(chēng)取 106 g 亞鐵青化鉀[K3Fe(CN)6•3H2O]加水至 1000 mL。

乙酸鋅溶液：稱(chēng)取 220g 乙酸鋅[Zn(CH3COO)2•2H20]溶于少量水中，加入 30mL 冰乙酸，加水稀釋至l000mL。

氨水(1+1)：氨水與水等體積混合。

2、色譜條件

色譜柱：Vertex C18 柱，250mm x 4.6 mm，5μm； 流動(dòng)相：甲醇+0.02mol/l 乙酸銨溶液(5:95)； 流速：1 mL／min；

進(jìn)樣量：20μL； 檢測波長(cháng) 230nm。

3、試樣溶液的制備

3.1 含脂肪、蛋白的樣品

稱(chēng)取約 10g 左右樣品于燒杯中（固體樣品要用攪拌機攪碎），加入約 60ml 蒸餾水，再超聲波水浴振蕩10 分鐘，然后用轉移到 100ml 比色管中，并用少量水潤洗干凈燒杯； 加入 5ml 亞鐵氰化價(jià)溶液，搖勻，再加入 5 mL 乙酸鋅溶液，搖勻； 根據 PH 計讀數，用氨水調節 PH 至接近中性；用水定容至 100ml 刻度，搖勻，用三角瓶,濾紙，玻璃棒，漏斗過(guò)濾； 吸取濾液約 1.5ml，用微孔濾膜過(guò)濾，濾液待上機分析。

3.2 不含脂肪、蛋白的樣品

稱(chēng)取約 10g 左右樣品于燒杯中（固體樣品要用攪拌機攪碎），加入約 60ml 蒸餾水，再超聲波水浴振蕩10 分鐘，然后轉移到 100ml 比色管中，并用少量水潤洗干凈燒杯； 根據 PH 計讀數，用氨水調節 PH 至接近中性；用水定容至 100ml 刻度，搖勻，用三角瓶,濾紙，玻璃棒，漏斗過(guò)濾； 吸取濾液約 1.5ml，用微孔濾膜過(guò)濾，濾液待上機分析。

注：1-安賽蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精鈉；混合標準溶液色譜圖

4、結果分析

4.1 儀器精 確度的測定

取濃度為苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜濃度為 10.0ug/ml，平行測定 7 次。

表 1：精 確 度的測定結果

分析結果可以得出，每個(gè)組分峰面積的相對標準偏差均小于 1％，表明儀器在選定條件下重現性好， *可以滿(mǎn)足分析測定的要求。

4.2 回收率的測定

分析結果的準確度可以用回收率來(lái)衡量?；厥章试浇咏?nbsp;100％，測得的結果越接近真值，即準確度越好。 同時(shí)平行測定結果的相對標準偏差可以表明方法的重現性。

取清涼茶、樣品分別進(jìn)行加標實(shí)驗，加入苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜濃度均為 10.00ug/ml 標 準溶液，平行測樣 7 次，進(jìn)行回收率實(shí)驗。測定結果見(jiàn)表 2。

表 2：清涼茶的加標測定結果和回收率

從上表可以看出清涼茶的加標測定的回收率：苯甲酸為 98.5%-103.4%，山梨酸為 98.3%-103.1%，糖 精鈉為 97.5%-104.3%,安賽蜜為 98.4%-103.3%。各組分的回收率都接近 ，滿(mǎn)足日常檢測的要求。